ABI 3730 XL測序

    Applied Biosystems推出的3730系列,代表了進行高通量測序和片段分析的新一代平臺,3730XL系統有96道毛細管,整合了自動化裝置和光學技術,我公司應用Applied Biosystems優化的試劑和專門的軟件系統,可以滿足客戶日益增加的通量需求,也可以滿足客戶對大規模測序在節省時間、降低成本和操作復雜性方面的要求提供全面服務。
   目前可提供菌液、純化PCR產物、未純化PCR產物及質粒等的測序。每天可完成7000份質粒DNA提取、純化和檢測,500份PCR樣品的切膠回收純化及800個測序反應。

 
 
工作原理
    雙脫氧鏈終止法,又稱為Sanger法,基本原理如下:DNA模板在DNA聚合酶、引物、四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP)存在下進行復制,在四管反應體系中分別按一定的比例引入四種雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3’-OH基團,當ddN-TP摻入鏈的末端時,該鏈就會停止延伸。如此每管反應體系中就產生了一系列長度不等的以ddNTP為3’端的DNA片段。

    Applied Biosystems 3730XL測序儀以Sanger法為基礎,并用熒光標記代替了同位素標記,從而大大提高了DNA測序的速度和準確性,是基于毛細管電泳和熒光標記技術的新一代DNA測序儀。測序反應產物加入測序儀后,兩極間極高的電勢差推動著各個熒光DNA片段在凝膠高分子聚合物中從負極向正極泳動,并相互分離,依次通過檢測窗口。由激光器發出的極細光束,通過精密的光學系統被導向檢測區,在此激光束以與凝膠垂直的角度激發熒光DNA片段。DNA片段上的熒光發色基團吸收了激光束提供的能量而發射出特征波長的熒光。這種代表不同堿基信息的不同顏色熒光經過光柵分光后再投射到CCD攝像機上同步成像,經計算機軟件分析后顯示測序結果。整個電泳過程結束時在檢測區某一點上采集的所有熒光信號就轉化為一個以時間為橫軸坐標,熒光波長種類和強度為縱軸的信號數據的集合。經測序分析軟件對這些原始數據進行分析,最后的測序結果以一種清晰直觀的圖形顯示出來。

應用領域:

(一)DNA常規測序

(二)鳥槍法測序

(三)EST測序 

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